Extração de Lipídeos da Gema e Análise por Cromatografia de Camada Fina

Aula de Extração de Lipídeos da Gema e Análise por Cromatografia de Camada Fina

OBJETIVO : Analisar e determinar através da cromatografia de camada delgada a composição dos lipídios presente na gema de ovo.

         Cromatografia é uma técnica de bastante importância na separação, identificação, e dosagem dos componentes de misturas de aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos e derivados, ácidos orgânicos, vitaminas, polímeros etc. A separação dos componentes de uma mistura por cromatografia baseia-se na diferença de afinidade desses componentes por duas fases, que estão em contato direto. Uma delas se movimenta (fase móvel), enquanto a outra permanece estacionária (Fase estacionária). Os componentes da mistura, que inicialmente são aplicados em uma das extremidades da fase estacionária, percorrem-na de forma que cada elemento terá uma velocidade diferenciada a depender de sua afinidade pela fase.

 

            Nesta prática foi realizada uma cromatografia de camada fina (TLC – Thin Layer Chromatography) que se constitui por uma técnica de adsorção líquido-sólido. Ela é baseada no mecanismo de partição, em que a separação se dá pelas diferenças de solubilidade dos componentes de uma mistura em duas fases líquidas, levando-se em conta seu coeficiente de partição. Neste tipo de cromatografia, a fase estacionária é formada por água ligada à celulose, principalmente por ligações de hidrogênio. A fase móvel utilizada neste caso foi o clorofórmio, que apresenta polaridade menor que a da água.

MATERIAIS E REAGENTES

 v  Béquer de 50 mL;

v  Erlenmeyer de 25 mL;
v  Proveta de 10 mL;
v  Papel de filtro;
v  Placa de Petri;
v  Béquer de 100 mL;
v  Capilares;
v  Amostra um ovo;
v  Éter;
v  Clorofórmio;
v  Metanol;
v  Água;
v  Ácido Acético;
v  Pipeta de Pasteur;
v  Vidro de Relógio;
v  Iodo Metálico;

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

·      Foi preparado dois tipo de reagentes para correr na CCD, a 1ª dimensão (vertical) e 2ªdimensão (horizontal), pela qual cada uma foi preparada com os seguintes componentes:

1ª dimensão (vertical): 21mL de clorofórmio, 7mL de metanol,0,7mL de água.

2ªdimensão (horizontal): 20mL de clorofórmio, 2,25mL de metanol,0,5mL de água e 3mL de ácido acético.

·      Abriu-se o ovo separando o seu conteúdo em dois béqueres (clara em um, gema em outro) sem romper a membrana que envolve a gema, a gema foi extraída com 25mL de éter;

·           Retirou-se aproximadamente 15 ml da gema do ovo colocando-a em um tubo de ensaio;

·    Com o bastão de vidro homogeneizou-se a solução até a aglutinação do material;

·      Foi preparado as placas de sílica para realização da cromatografia, e em seguida preparamos a cuba com iodo metálico afim de revelar os componentes presente nela;

·      Para aumentar a sublimação do iodo, colocamos a cuba em um banho quente;

·      Injetamos na placa a amostra(extrato etéreo de gema) 3 vezes;

·      Em uma cuba foi colocado a 1ª dimensão (vertical) e em seguida colocamos a placa,o mesmo procedimento foi feito com a 2ªdimensão (horizontal),deixando aproximadamente 25 min cada uma;

·      Deixamos mais 25 min na cuba com iodo para revelação e visualização dos lipídios presente na mesma.

RESULTADOS

A cuba cromatográfica contendo o papel com as amostras enquanto ele é percorrido pela fase móvel. 

            O solvente contido no fundo da cuba em contato com o papel, por capilaridade, movimentou-se então de forma ascendente, arrastando assim as substâncias contidas na amostra de forma diferenciada, dependendo da afinidade dessas substâncias com a fase móvel

 Extração 200 mg de gema em 1,5 ml de clorofórmio:metanol (2:1). Lavagem em 5 volumes de água. Cromatografia em clorofórmio:metanol:agua (30:10:1). Coloração em atmosfera de iodo. 
Quantidades decrrescentes do extrato foram aplicadas esquerda para a direita 

Através da cromatografia é possível realizar a identificação dos compostos contidos numa determinada amostra. Isto é realizado através da determinação do fator de retenção (Rf) da substância, dado pela distância percorrida pela substância dividida pela distância percorrida pela fase móvel. O resultado constitui-se em um valor que varia de 0 a 1 a ser comparado com os valores Rf padrões.